禽呼肠孤病毒分子信标LAMP检测方法

分子信标是一种灵敏度高、特异性好、具有茎环结构的双标记核酸探针，其通过与靶标特异性结合使空间构象发生改变，从而呈现相应的荧光信号，将分子信标与LAMP反应体系相结合，根据ARV的S1基因序列的高保守区域设计1套LAMP引物，并取F1c和B1c之间的序列设计分子信标，在５′端标记Cy5荧光基团，３′端标记BHQ-3淬灭基团，通过实时浊度仪观察，同时对反应体系和反应条件进行优化，试验结果通过多通道荧光成像仪进行观察，ARV阳性样品在荧光成像仪下显示红色荧光，而其他几种病原样品无荧光显示。建立的ARV分子信标LAMP检测方法仅特异性扩增ARV，与其他几种禽类常见疾病无交叉反应。反应结果直接通过荧光成像仪进行观测，有效避免了开盖检测造成的气溶胶污染，提高了反应的准确性和特异性，可为ARV的临床检测和有效防控提供技术支持。